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动物组织中DNA提取与鉴定的实验指南 슣## 一、实验原理 ꊧ滥🃦术:利用物体高速旋转时产生的强大离心力,使细胞、病毒等大分子物质沉降或漂浮,从而实现某些颗粒的分离。 颗粒的沉降速度取决于离心机的转速及其自身与中心轴的距离,不同大小、形状、密度的颗粒以不同的速度沉降。 动物组织中的RNA与DNA大部分与蛋白质形成核蛋白,在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度有显著差异。 二、实验器材和试剂 ️ 新鲜动物肝脏组织 研钵或匀浆器 电子天平 离心机 沸水浴 95%乙醇 二苯胺试剂(取19份苯胺于1mL无水乙醇中加入275mL浓硫酸,置棕色瓶中,临用前新鲜配制) 三、实验步骤 取新鲜动物肝脏,加入6mL 1mol/L的NaCl溶液,在研钵中进行研磨或在匀浆器中匀浆5分钟。 用滴管从小烧杯中吸取6mL肝组织匀浆,放入带刻度的离心管中,离心(4000rpm,10分钟)。 取上清液移入离心管中,加入等体积的1.5% SDS,混合均匀,振荡5分钟(4000rpm,5分钟)。 取3mL上清液移入离心管中,加入2倍体积的95%乙醇,混合均匀,振荡10分钟,使乙醇充分沉淀DNA,离心(4000rpm,5分钟),弃上清液。 向沉淀中加入2mL 1mol/L NaCl溶液,使沉淀充分溶解,然后转移至试管中,加入2mL二苯胺试剂,混合均匀,加热观察颜色变化。 四、结果 试管由白色变为蓝色。原因:第一次离心可将蛋白质分离出来,加入SDS,可使核蛋白变性沉淀,将核酸物质萃取出来,储存于上清液中,再加入乙醇可使DNA沉淀。DNA可溶于1mol/L NaCl溶液中,加入二苯胺试剂后,水浴加热可变为蓝色,从而鉴定DNA。 五、讨论 在鉴定DNA时,要将试剂SDS放入试管中,不能向离心管中加。 将离心管放入离心机后,要在其对称位置放入质量相同的离心水,以减少误差。 在离心时,一定要大力摆动,否则会导致沉淀过少,干扰实验结果。 在制备肝组织匀浆时应研磨充分,否则易导致吸量不足,干扰实验。 SDS预处理要在6℃水浴中温热,原因:①促进SDS与样品充分混合,使SDS与蛋白质充分作用;②可以增加SDS的溶解度,从而提高效率。 二苯胺试剂要新鲜配置,原因:①易被空气氧化,会影响其作为DNA鉴定试剂的准确性和稳定性;②保证反应的准确性,新鲜配制的二苯胺试剂与DNA反应的速率和效果最佳,从而提高实验的准确性和可重复性。 安全性:二苯胺试剂具有一定毒性,新鲜配置可以减少试剂在储存和使用过程中对人体的危害。
悬浮细胞处理冷冻,一文搞定! 在细胞培养过程中,许多实验人员可能会遇到各种疑难问题。以下是一些常见问题的解答,希望能帮助到你! 悬浮性细胞的继代处理 对于悬浮性细胞,只需持续加入新鲜培养基到原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可。如果培养液太多,可以将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时,取出一部分含细胞的培养液到新的培养角瓶中,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复此步骤即可。 离心速率的选择 回收动物细胞时,离心速率一般为300xg(约1,000rpm),离心时间为5-10分钟。过高的转速可能会导致细胞死亡。 接种密度的确定 𑊦姧密度可以根据细胞株的基本数据或稀释分盘的比例来确定。细胞数太少或稀释过多都会影响细胞的生长。 冷冻培养基的成分 ❄️ 动物细胞冷冻保存时常用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(二甲亚砜)和90-95%原来细胞生长用的新鲜培养基的混合物。注意,由于DMSO稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。 DMSO的等级和过滤方式 ꊥ𗥆存使用的DMSO必须为Tissue culture grade(如Sigma D2650),其本身即为无菌状况。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于4Ⰳ,避免反复冷冻解冻造成DMSO的裂解而释出有害物质,并可减少污染的机会。若要过滤DMSO,则须使用耐DMSO的Nylon材质滤膜。 冷冻保存方法 ❄️ 方法一:冷冻管置于4℃30~60分钟,然后转移到-20℃30分钟,再放入-80℃16~18小时(或隔夜),最后放入液氮槽的vapor phase长期储存。 方法二:使用已设定程序的可程序降温机,每分钟降1-3℃至-80℃以下,再放入液氮槽的vapor phase长期储存。注意,-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡。也可以跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,但存活率会稍微降低。 希望这些解答能帮助你更好地进行细胞培养实验!如果有任何疑问,欢迎随时交流探讨!
常见阴阳离子的鉴定实验 ꠦ 机化学实验报告来啦!这次我们探索的是常见阴阳离子的鉴定方法。 ᠥꌧ: 掌握一些金属元素及其化合物的性质,学会常见阳离子混合液的分离和检出方法。 젥ꌤ褸材料: 试管、离心机、离心试管、烧杯等,还有各种溶液如MgCh溶液、CaCl溶液等。 实验过程与数据处理: 在试管中加入几滴MgCh溶液,再加入bM溶液,会生成絮状沉淀。然后加入镁试剂,沉淀变蓝色!接下来,我们用同样的方法鉴定了CaⲢBaⲢ阳离子。阴离子的鉴定则通过观察沉淀的颜色和溶解性来进行。 实验收获: 通过这次实验,我们不仅学会了如何鉴定常见的阴阳离子,还了解了不同离子之间的反应和性质。真是太有趣啦! ᠥ㫯在溶解BaSO₄时,为什么选择醋酸溶液而不是盐酸?因为盐酸会引入Cl⁻,可能对其他离子的检验造成干扰。而醋酸盐大多易溶于水,不会出现这种情况哦! 这次实验不仅锻炼了我们的动手能力,还让我们对化学世界有了更深的了解。快来试试吧!ꀀ
如何妥善保存采集的数据? 在数据采集后,正确的保存方式至关重要。以下是几种常见数据的保存方法: 1️⃣ 尿液样本:将采集的500ul尿液放入无菌试管中,离心后取上清液,分装冻存。在2-8℃下可保存24-48小时,-20℃下可保存1个月,而-70℃下可长期保存达6个月。 2️⃣ 脑脊液样本:采集后同样放入无菌试管,离心处理,然后分装冻存。保存期限与尿液相似,可根据实验需求选择合适的保存温度。 3️⃣ 细胞上清液:采集500ul细胞培养上清液,离心后取上清,分装冻存。保存期限同样根据温度而定,2-8℃下可保存24-48小时,-20℃下可保存1个月,-70℃下可长期保存。 4️⃣ 细胞裂解液:经过洗涤和裂解处理后,离心取上清液,分装冻存。保存期限与上述样本相似,可根据实验需要选择合适的保存条件。 记住,正确的保存方法对于数据的稳定性和实验结果的准确性至关重要。根据实验需求选择合适的保存温度和时间吧!
酵母RNA提取与鉴定实验报告 实验日期:2024年1月22日 天气:晴朗 气温:20℃ 实验预习报告 掌握酵母RNA提取的方法 了解RNA组分的鉴定原理 젥ꌥ理 在酵母中,RNA与DNA的分离是提取RNA的关键步骤。通过使用特定的酶和化学试剂,可以将RNA从酵母中提取出来。RNA的鉴定则通过特定的化学反应来实现,如磷酸的检测、核糖的显色反应以及嘌呤碱基的检测。 ꠤ褸试剂 ꠤ诼试管、量筒、滴管、离心机、吸管、烧杯、水浴锅 ꠨:硫酸洗液、苍黑的二乳化铁溶液、酵母培养液 实验步骤 1️⃣ 酵母RNA的提取 将酵母培养液离心,保留沉淀并干燥。 将干燥的酵母沉淀用适量的提取液处理,离心后收集上清液。 2️⃣ RNA的鉴定 水解反应:将提取的RNA进行水解,生成磷酸、核糖和嘌呤碱基。 磷酸的检测:通过与特定的试剂反应,磷酸会生成蓝色的还原产物。 核糖的显色反应:核糖与特定的试剂反应,生成鲜味的颜色变化。 嘌呤碱基的检测:嘌呤碱基与特定的试剂反应,生成白色沉淀。 实验记录 㷩 𘯼液相为铜蓝色 𘧳:溶液变为鲜味色 呤碱基:产生白色架状沉淀 实验总结 通过本实验,我们成功提取了酵母中的RNA,并对其进行了组分鉴定。实验结果表明,RNA的提取和鉴定是生物化学实验中的重要步骤,对于了解酵母的分子结构和功能具有重要意义。 实验注意事项 在加热酵母时,应时常振荡试管,使其均匀受热。 使用离心机时,确保各试管内反应体含量大致相同。 实验评价 优点:提取方法简单,提取的RNA质量较高。 缺点:提取过程中可能会破坏RNA的完整性。 实验改进建议 改进提取方法,减少对RNA完整性的破坏。 优化鉴定步骤,提高实验的准确性和可靠性。
ELISA样本处理,一文搞定! 在进行ELISA实验时,样本的处理至关重要。以下是几种常见样本的处理方法,帮助你更好地准备实验材料。 血清处理 𘊩集血液样本:使用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液。 室温放置:将试管或离心管在室温下放置1小时,或在2-8℃条件下过夜,分离出血清。 离心收集:在2-8℃条件下,以1000㗧离心20分钟,小心收集上层血清。 血浆处理 𘊩集血液样本:使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液,采集后30分钟内处理。 离心分离:在2-8℃条件下,以1000㗧离心15分钟,小心收集上层血浆。 常见抗凝剂:EDTA钠盐、肝素钠、枸橼酸钠等。 细胞培养上清液处理 슦𖩛上清液:将细胞培养上清液吸入离心管中。 离心去除杂质:在2-8℃条件下,以1000㗧离心20分钟,除去细胞碎片和杂质,收集上清液。 细胞裂解液处理 슦细胞:吸出培养板中的培养基,用胰蛋白酶消化细胞,再加入适量的培养基,将培养板上的细胞冲洗干净(悬浮细胞可以省略该步骤)。 收集细胞:将细胞悬浮液收集到离心管中,在2-8℃条件下,以1000㗧离心5分钟,再吸去培养基,用预冷PBS洗涤细胞3次。 重悬细胞:加入适量的预冷PBS(建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂),重悬细胞。添加比例:约1㗱06个细胞加入150-250 PBS重悬细胞。 裂解细胞:使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融,重复冻融过程数次,直至细胞完全裂解。也可使用超声波细胞破碎器,超声处理悬浮液来裂解细胞。 离心收集:在2-8℃条件下,以1500㗧离心10分钟,去除细胞碎片,收集上清液。 组织匀浆处理 슥组织:用预冷的PBS(0.01M,PH7.4)冲洗组织,除去表面残留的血液或杂质。 称重切片:将组织块称重,再切成尽可能小的碎块,以便充分匀浆。 制备匀浆:加入适量的预冷PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g组织样品对应9mL PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂),用玻璃匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。 离心收集:将匀浆液吸入离心管中,2-8℃条件下,以5000㗧离心5分钟,收集上清液。 通过以上步骤,你可以更好地准备ELISA实验的样本,确保实验结果的准确性。
PCR实验室造价揭秘:科研背后的经济账 PCR技术,这个分子生物学领域的明星工具,为科研的进步和创新提供了强大的支持。但你知道吗?要建一间符合国际标准的PCR实验室,到底需要多少钱呢?最近,我们通过深入调研和与专业人士交流,终于揭开了PCR实验室的造价秘密,带你一探究竟! 一、基础设备:不可或缺的硬件支持 𛊐CR实验室的核心设备包括PCR仪、制冰机、电泳仪和离心机等。这些设备是PCR实验顺利进行的关键。一般来说,PCR仪的价格在2万元到10万元之间,制冰机和冰箱则在5000元到1万元左右,电泳仪和离心机的价格则分别在1万元到5万元不等。 二、生物安全及配套设施:确保实验室安全 为了确保PCR工作的生物安全,实验室需要安装适当的排气系统、洗消和无菌处理设备等。这部分的投资因实验室规模而异,通常在20万元到50万元之间。 三、耗材与试剂:实验室的“血液” 𘊐CR实验离不开各种耗材和试剂,包括PCR模板、引物、核苷酸及扩增酶等。耗材方面有离心管、PCR片、试管、细胞培养耗材等。根据我们的数据,每年维持实验室运营的耗材和试剂成本大约在5万元到10万元。 四、建筑与装修:打造舒适的实验环境 PCR实验室的建筑与装修费用也是一项重要开支。合理布局的实验室建筑费用大约在10万元到30万元之间。考虑到实验室的设计与装修要求,这项费用会根据实验室面积及配置的科学仪器有所不同。 五、特殊设备与在线监控系统:提升实验室效率 随着科技的发展,PCR实验室的高效运作离不开特殊设备的支持。例如,UV灯、紫外线灭菌器、纯水机和在线监控系统等。这些设备不仅提高了实验室效率,也是提高实验室安全性的必要保障。这部分投入一般在5万元到10万元之间。 总结:预算与挑战 综合来看,建设一间符合国际标准的PCR实验室,预算大约在60万元到130万元之间。当然,这个数字只是一个参考,具体的投入还会根据实验室的规模、科研需求以及地区经济环境等因素进行调整。 尽管PCR实验室的建设成本高昂,但这并不妨碍科研狂热者追求进步的步伐。毕竟,许多伟大的科学突破都是基于PCR技术的。因此,无论是政府部门还是科研机构,都应该给予更多的支持与鼓励。 让我们一起期待更多科研奇迹的诞生!
实验室必备耗材清单,看看你缺什么? 大家在实验室里常用的耗材有哪些呢?我先来给大家分享一些必备的耗材,绝对是你实验路上不可或缺的好帮手! 金属制品 口水龙头、样品匙(药勺)、坩埚铁架台、滴定台、试管架、坩埚钳、酒精喷灯、夹子、镊子、实验剪刀、升降台、本生灯等。这些金属制品在实验室里可是大有用处,尤其是那些需要高温加热的实验。 塑料制品 ᑦ烧杯、稀释瓶、洗瓶、塑料量筒、气泡膜、塑料离心管、塑料量杯、PE手套、漏斗架、试管架、酒精瓶、吸管、塑料瓶、塑料滤器、塑料培养皿、移液枪架、氟化瓶、塑料滴管、离心管盒、载玻片盒、比色管架、加样槽等。塑料制品不仅轻便耐用,而且价格也比较亲民,是实验室里的常见选择。 更多耗材 ꊥ𘃦、瓷蒸发皿、瓷方舟、白反应板、瓷坩埚、瓷研钵、瓷坩埚架、燃烧管等陶瓷制品。标签纸、试纸、PH试纸、滤纸、称量纸、擦镜纸等纸类制品。硅胶管、白胶塞、烧瓶托、洗耳球、手套、反口塞、硅胶塞、乳胶管、橡胶管、双连球等橡胶制品。窄口瓶、龙头瓶、滴瓶、广口瓶、加液器、洗瓶、酒精灯、研钵、燃烧瓶、过滤瓶、干燥器等玻璃器皿。 生化耗材 培养板、冻存盒、深孔板、PCR冷冻管盒、培养皿、染色架、培养管、细胞冻存、酶标板等。这些生化耗材在细胞培养和分子生物学实验中可是必不可少的。 实验器材 슦、搅拌子、尼龙膜、氟化瓶、F4烧杯、F4坩埚、F4塞等。滴管、试管、离心管、比色皿、干燥管、培养皿、结晶皿、抽气管、表面皿、导气管、蒸发皿等皿管类。砂芯漏斗、短管标准漏斗、分液漏斗、长管标准漏斗、滴液漏斗、安全漏斗、抽滤漏斗等漏斗类。玻璃层析柱、连接管、管带螺口、分馏头干燥塔、接受管、冷凝管、蒸馏头、空心塞、防溅球、弯接管塞、分馏管、分馏柱、蒸馏弯头等标准口类。比重瓶、量筒、量杯、吸管、气体流量计、滴定管、称量瓶、量瓶、吸收管、测醛瓶、比色管、采样管等量器类。蒸馏器、吸收瓶、吸收器、脂肪抽出器、沸点仪、分水器等成套仪器。砂芯坩埚、盖玻片、玻璃珠、砂芯滤球、玻璃棒等其他类。 这些耗材看似不起眼,但在实验室里却是必不可少的。希望这份清单能帮到你,让你的实验更加顺利!ꀀ
原核表达全攻略:从入门到高级技巧 原核表达,听起来有点高大上,但其实它就是我们常说的在大肠杆菌中表达蛋白质的方法。这个过程可以分为几个关键步骤,下面我就来详细讲解一下。 第一步:准备工作 ꊩ斥 ,你需要从LB平板上挑取几个单菌落,然后将其接种到含有相应抗生素的LB液体培养基中。接下来,把培养基放入37℃的摇床中,过夜培养。这个步骤很关键,因为好的起始菌落能大大提高后续实验的成功率。 第二步:扩大培养 𑊧쬤䩯𘊨屺100的比例接种到新鲜的LB培养基中,继续摇床培养大约3小时。这个时候,你需要测量一下OD值,目标值在0.6到0.8之间。这个步骤非常关键,因为不同的IPTG浓度会影响蛋白的可溶性表达。 第三步:诱导表达 ꯸ 接下来,分别加入IPTG(终浓度0.5mM最适),具体浓度可以根据后续实验摸索。不同载体和感受态可能会对表达环境有不同要求,所以这一步要特别小心。 第四步:收集菌体 ꨯ管中取1ml菌液加入到1.5ml离心管中。如果OD值不一样,OD值小的可以多取一些。然后离心(8000r/min),3分钟,去掉上清液。在每个离心管中加入90的PBS,悬浮沉淀,超声1分钟左右,再次离心(10000r/min),5分钟,吸取上清液。 第五步:检测表达 슥楏90PBS重悬沉淀,分别在上清和沉淀中加入30的4xLoadingBuffer悬浮沉淀。然后放入沸水中10分钟或使用煮样器(100Ⰳ)10分钟,取出后进行电泳检测。通过电泳结果,你可以判断蛋白是表达在上清还是沉淀中。 小结 原核表达虽然看起来复杂,但其实只要掌握了这些基本步骤,就能轻松上手。希望这篇攻略能帮到你,祝你实验顺利!如果有任何问题,欢迎留言讨论哦!
小白鼠的肝糖原实验:颜色变化大揭秘! 在这次颜色实验中,我们研究了饱食和饥饿状态下小白鼠的肝糖原含量。过离心机沉淀糖原,我们发现离心管中装满了溶液,但离心时竟然没有撒出来,这真是个奇迹!上清液后,我们用碘液鉴定糖原,发现饥饿和饱食状态下的小白鼠肝糖原颜色都有所不同,尽管颜色都挺深,但还是有细微差别。 接下来,我们将糖原水解成葡萄糖,并用班氏试剂进行测定。ꠥ訿个过程中,我们不小心将NaOH加到了蒸馏水中,结果蒸馏水变黑了! 幸好,最后饱食状态下的试管还是变红了(加了G),这让我们松了一口气。 通过这次实验,我们不仅学到了如何测定肝糖原含量,还体验了科学探索的乐趣。찟
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